Plásmido Doble Nickase (h) CRMP-4: sc-403305-NIC

DPYSL3 codifica la proteína mediadora de la respuesta a collapsina 4 (CRMP-4), una fosfoproteína citosólica que vincula señales guía extracelulares con la remodelación del citoesqueleto en neuronas y otras células polarizadas. CRMP-4 participa en la señalización de semaforina/neuropilina-plexina y en vías de quinasas aguas abajo que regulan la dinámica de los microtúbulos, la extensión de neuritas, el colapso del cono de crecimiento y la guía axonal. Fuera del sistema nervioso, DPYSL3 se ha implicado en programas de migración y adhesión celular mediante la coordinación de la organización del citoesqueleto. Se ha asociado la alteración de la expresión y de los estados de fosforilación de DPYSL3/CRMP-4 con mecanismos del neurodesarrollo y de la neurodegeneración, y también se ha estudiado en la invasividad de células tumorales y en fenotipos metastásicos como un marcador dependiente del contexto de la motilidad celular.

CRMP-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DPYSL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DPYSL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DPYSL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DPYSL3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.