Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRLR: sc-401631-ACT

CALCRL code pour le récepteur apparenté au récepteur de la calcitonine (CRLR), un RCPG de classe B qui forme des complexes récepteurs fonctionnels avec les protéines RAMP afin de relayer la signalisation de peptides vasoactifs tels que le CGRP et l’adrénomédulline. Lors de la liaison du ligand, le CRLR active des voies couplées aux protéines G, notamment la voie AMPc/PKA, ainsi que des programmes transcriptionnels en aval qui régulent le tonus vasculaire, la fonction de barrière endothéliale, la biologie lymphatique et les réponses inflammatoires. L’activité du CRLR croise des réseaux angiogéniques et de réponse au stress, influençant des processus tels que la vasodilatation, l’homéostasie des fluides et la signalisation neurovasculaire. Une expression ou une signalisation dérégulée de CALCRL a été associée à des phénotypes cardiovasculaires et lymphatiques, et a été étudiée dans des contextes impliquant les voies neurovasculaires liées à la migraine, le remodelage vasculaire pulmonaire et l’angiogenèse associée aux tumeurs.

CRLR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CALCRL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRLR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CALCRL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CALCRL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRLR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CALCRL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRLR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRLR dans les cellules tumorales présentant une expression de CALCRL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.