Plasmide Double Nickase (h) Crk II: sc-402415-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Crk II correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Crk II Double Nickase (h) et le plasmide Crk II Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Crk II Antibody (B-4): sc-390132
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Crk II | sc-402415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Crk II | sc-402415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRK code pour Crk II, une protéine adaptatrice contenant des domaines SH2/SH3 qui couple des motifs tyrosine phosphorylés à des effecteurs en aval contrôlant la transduction du signal. Crk II participe aux voies des intégrines et des récepteurs de facteurs de croissance en reliant des protéines telles que p130CAS/BCAR1 et des GEFs de la famille DOCK à la signalisation des GTPases Rho, régulant ainsi le remodelage de l’actine, l’adhérence cellulaire, la migration et la survie. Par son implication dans la dynamique des adhésions focales et dans des réseaux associés à MAPK/PI3K, des altérations de la signalisation CRK sont fréquemment étudiées dans des contextes de transformation oncogénique, d’invasion et de phénotypes associés aux métastases. La dérégulation des complexes médiés par Crk II a également été étudiée dans des modèles de signalisation développementale aberrante et de voies de réponse au stress pertinentes pour la biologie des maladies humaines.
Crk II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.