Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-3 (m): sc-419036

Présentation

Crisp3 code la protéine sécrétée riche en cystéines 3 (CRISP-3), un membre sécrété de la superfamille CAP impliqué dans la signalisation extracellulaire et la modulation des interactions entre cellules immunitaires et épithéliales. CRISP-3 est enrichie dans les tissus exocrines et muqueux et a été associée à la régulation de l’activité des protéases, à la défense antimicrobienne et aux signaux inflammatoires au sein du microenvironnement local. Grâce à sa localisation extracellulaire, CRISP-3 peut influencer le remodelage tissulaire et des processus d’immunité innée qui recoupent les voies de réponse aux plaies et de fonction barrière. Une expression dérégulée de CRISP-3 a été rapportée dans des contextes liés à l’inflammation et dans des signatures transcriptomiques associées au cancer, faisant de Crisp3 un nœud utile pour étudier la régulation du microenvironnement et la biologie des facteurs sécrétés dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crisp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crisp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crisp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRISP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crisp3 pour l'étude de la signalisation de CRISP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crisp3 essentiels à la fonction de CRISP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crisp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRISP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CRISP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crisp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRISP-3 plasmide HDR (m) et le CRISP-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crisp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crisp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.