Plásmido CRISPR de Activación (h) CRF-RI: sc-400730-ACT

CRHR1 codifica el receptor 1 del factor liberador de corticotropina (CRF-R1), un GPCR de clase B que se une a la CRH y a las urocortinas para regular la señalización celular asociada al estrés. Tras su activación, CRF-R1 se acopla principalmente a Gs para estimular la adenilil ciclasa, aumentar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB, con acoplamiento adicional a las vías MAPK/ERK y a rutas asociadas al calcio de manera dependiente del contexto. La señalización mediada por CRHR1 modula las respuestas neuroendocrinas a través del eje HHA (hipotálamo‑hipófisis‑adrenal) e influye en la excitabilidad neuronal, la plasticidad sináptica y la comunicación cruzada con procesos inflamatorios. La actividad y los patrones de expresión desregulados de CRHR1 se han implicado en fenotipos neuropsiquiátricos relacionados con el estrés y en una disfunción neuroendocrina más amplia, lo que lo convierte en una diana útil para desentrañar la arquitectura de las vías de señalización en modelos celulares humanos relevantes.

CRF-RI El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRHR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRF-RI El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRHR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRHR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRF-RI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRHR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRF-RI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRF-RI en células tumorales con expresión de CRHR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.