Plásmido CRISPR de Activación (m) CREM: sc-419799-ACT

El CREM (modulador del elemento de respuesta al AMPc) de ratón es un factor de transcripción bZIP de la familia CREB/ATF que se une a elementos de respuesta al AMPc para regular programas de expresión génica dependientes de estímulos. Mediante la integración de la señalización de AMPc/PKA, entradas dependientes de calcio y eventos de fosforilación vinculados a MAPK, CREM influye en las dinámicas transcripcionales que moldean la plasticidad neuronal, las salidas endocrinas y los estados de activación de las células inmunitarias. La diversidad de isoformas de CREM, incluidas variantes inducibles activadoras y represoras como ICER, permite un control específico del contexto de redes génicas de respuesta inmediata y metabólicas. La actividad desregulada de CREM se ha asociado con alteraciones de la fisiología reproductiva, de la señalización sensible al estrés y con patología mediada por el sistema inmunitario en modelos experimentales, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos del control transcripcional en vías relevantes para la enfermedad.

CREM El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Crem sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CREM El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Crem en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Crem, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CREM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Crem y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CREM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CREM en células tumorales con expresión de Crem silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.