Plasmide CRISPR/Cas9 KO creatine kinase-M (h2): sc-401132-KO-2

Présentation

CKM code la créatine kinase M (CK‑M), une phosphotransférase cytosolique qui catalyse le transfert réversible d’un groupement phosphate de la phosphocréatine vers l’ADP afin de régénérer l’ATP, contribuant ainsi à stabiliser la charge énergétique cellulaire lorsque la demande fluctue. Fortement enrichie dans les muscles squelettique et cardiaque, CK‑M soutient l’homéostasie de l’ATP en lien avec la glycolyse, la phosphorylation oxydative et le transport d’énergie médié par la navette phosphocréatine dans les myofibres. Une altération de l’activité de CKM affecte la contractilité musculaire et les réponses au stress métabolique, et elle est fréquemment évaluée dans des études sur les myopathies, les lésions musculaires et le remodelage cardiométabolique. CKM constitue également un nœud mécanistique pour étudier l’adaptation énergétique, la fonction mitochondriale et la signalisation liée au redox dans des modèles de muscle strié.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO creatine kinase-M (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CKM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CKM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CKM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine creatine kinase-M.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CKM pour l'étude de la signalisation de creatine kinase-M, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CKM essentiels à la fonction de creatine kinase-M
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CKM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le creatine kinase-M plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le creatine kinase-M plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CKM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le creatine kinase-M plasmide HDR (h) et le creatine kinase-M (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CKM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CKM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.