Plasmide Double Nickase (h) creatine kinase-B: sc-401868-NIC

CKB code la créatine kinase B, une phosphotransférase cytosolique qui catalyse le transfert réversible d’un phosphate entre l’ATP et la créatine afin de tamponner la charge énergétique cellulaire. En tant que composant clé de la navette phosphocréatine, CKB soutient la régénération rapide de l’ATP et couple la demande énergétique à la glycolyse et à la phosphorylation oxydative, en particulier dans les tissus excitables et métaboliquement actifs. L’activité de la créatine kinase B influence des processus tels que la dynamique du cytosquelette, le transport ionique membranaire et la fonction synaptique grâce au contrôle local de la disponibilité en ATP. Une expression ou une activité altérée de CKB a été associée à des phénotypes de stress métabolique et fait fréquemment l’objet d’études en neurobiologie et dans le domaine de l’énergétique des cellules tumorales.

creatine kinase-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CKB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CKB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CKB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CKB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.