Plasmide CRISPR d'Activation (h) creatine kinase-B: sc-401868-ACT

Le gène humain **CKB** code la créatine kinase B, une phosphotransférase cytosolique qui catalyse le transfert réversible d’un phosphate entre l’ATP et la créatine afin de produire de la phosphocréatine, assurant une réserve tampon rapide d’ATP dans les cellules dont la demande énergétique fluctue. En couplant les produits de la glycolyse et de la phosphorylation oxydative à une régénération localisée de l’ATP, la créatine kinase B contribue à la bioénergétique cellulaire, au transport ionique et à la dynamique du cytosquelette, en particulier dans les tissus neuronaux et autres tissus excitables. Des modifications de l’expression de **CKB** et de l’activité de la créatine kinase ont été associées aux réponses au stress métabolique et ont été rapportées dans des études sur les dysfonctionnements neurologiques et la bioénergétique des cellules tumorales, ce qui souligne son intérêt en tant que marqueur et nœud mécanistique dans la recherche sur l’homéostasie énergétique.

creatine kinase-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CKB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

creatine kinase-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CKB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CKB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de creatine kinase-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CKB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de creatine kinase-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie creatine kinase-B dans les cellules tumorales présentant une expression de CKB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.