Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRBN: sc-412142-ACT

Le gène humain **CRBN** code la céréblon, un récepteur de substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine **CUL4–DDB1**, qui contrôle l’homéostasie protéique en orientant des cibles spécifiques vers l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome. En régulant la dégradation dépendante de l’ubiquitine, CRBN influence des programmes transcriptionnels, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire, ce qui le relie à des voies impliquées dans la différenciation et la signalisation immunitaire. CRBN a été étudié dans le contexte de la biologie du développement et de la fonction neuronale, et toute perturbation de son expression ou de son activité est associée à une protéostasie altérée et à des phénotypes pertinents pour la maladie. En tant que nœud central de la régulation du système ubiquitine–protéasome, CRBN est fréquemment analysé afin de comprendre la sélection de substrats dépendante du contexte et les conséquences sur la signalisation en aval.

CRBN Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRBN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRBN Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRBN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRBN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRBN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRBN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRBN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRBN dans les cellules tumorales présentant une expression de CRBN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.