Plásmido CRISPR de Activación (h) CRB3: sc-403145-ACT

CRB3 (crumbs homolog 3) codifica una proteína de polaridad apical que se localiza en complejos asociados a las uniones estrechas y ayuda a organizar la arquitectura de las células epiteliales. Al sostener la polaridad apicobasal, la integridad de las uniones y el tráfico vesicular, CRB3 contribuye a procesos como la formación del lumen, la ciliogénesis y la proliferación regulada a través de redes de señalización asociadas a la polaridad. La expresión o localización alteradas de CRB3 se han vinculado con la pérdida de la organización epitelial y la desregulación de la homeostasis tisular, características que se examinan con frecuencia en estudios sobre progresión tumoral y metástasis. Como determinante de polaridad conservado, CRB3 se utiliza ampliamente como herramienta molecular para investigar la diferenciación epitelial y la función de barrera en modelos celulares humanos.

CRB3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRB3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRB3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRB3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRB3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRB3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRB3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRB3 en células tumorales con expresión de CRB3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.