CRALBP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402092-ACT

RLBP1 kodiert das zelluläre Retinaldehyd-bindende Protein (CRALBP), ein lösliches Retinoid-Chaperon, das besonders im retinalen Pigmentepithel und in Müller-Gliazellen angereichert ist und 11-cis-Retinal sowie 11-cis-Retinol bindet. Durch Stabilisierung und Transport von cis-Retinoid-Zwischenprodukten unterstützt CRALBP Isomerisierungs- und Recycling-Schritte, die im visuellen Zyklus die Verfügbarkeit des Chromophors für Photorezeptoren aufrechterhalten. Diese Funktion verbindet RLBP1 mit dem Retinoidstoffwechsel, dem subzellulären Retinoidtransport und der lichtabhängigen Wiederherstellung der Phototransduktionskompetenz. Eine veränderte Expression oder Funktion von RLBP1 ist mit erblichen Netzhautdystrophien assoziiert, die durch eine beeinträchtigte Dunkeladaptation und eine fortschreitende Netzhautdegeneration gekennzeichnet sind, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der retinalen Homöostase und von Stressantworten macht.

CRALBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RLBP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CRALBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RLBP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RLBP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CRALBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RLBP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CRALBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CRALBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RLBP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.