CRABP-I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419790

Descripción general

Crabp1 codifica la proteína celular de unión al ácido retinoico 1 (CRABP-I), un transportador intracelular de alta afinidad que amortigua y moviliza el ácido retinoico todo-trans para moldear la disponibilidad de retinoides en el citosol y el núcleo. Al modular la distribución y el metabolismo del ácido retinoico, CRABP-I influye en programas de transcripción dependientes de RA que controlan decisiones de destino celular, diferenciación y el patrón tisular. En sistemas murinos, Crabp1 se utiliza para analizar dinámicas de señalización de retinoides específicas del contexto, distintas de la activación canónica de RAR/RXR, incluidas las interacciones con el catabolismo de RA y la capacidad de respuesta celular a señales derivadas de la vitamina A. Las alteraciones en el manejo de retinoides son ampliamente relevantes para fenotipos del desarrollo y para la desregulación de la diferenciación y la homeostasis asociada a enfermedades, lo que convierte a Crabp1 en un nodo útil para estudios de perturbación a nivel de vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRABP-I (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Crabp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Crabp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Crabp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRABP-I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Crabp1 para la investigación de la señalización de CRABP-I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Crabp1 críticos para la función de CRABP-I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Crabp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CRABP-I CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CRABP-I CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Crabp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRABP-I (m) y el plásmido HDR CRABP-I (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Crabp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Crabp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.