CRABP-I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405485-ACT-2

O CRABP1 humano codifica a proteína de ligação ao ácido retinoico celular I (CRABP-I), um transportador citosólico de alta afinidade que atua como tampão e veículo de tráfego do ácido retinoico all-trans, moldando sua disponibilidade para a sinalização dependente de retinoides. Ao modular a distribuição e o metabolismo do ácido retinoico, a CRABP-I influencia programas transcricionais regulados pelos receptores de ácido retinoico e se integra a vias que controlam a diferenciação celular, a proliferação e o padrão de desenvolvimento. Alterações na expressão de CRABP1 ou no manejo de retinoides estão implicadas na desregulação da sinalização por ácido retinoico observada em múltiplos cânceres e em contextos neurodesenvolvimentais ou neurodegenerativos, nos quais a homeostase de retinoides afeta o destino celular e as respostas ao estresse. Ferramentas de edição gênica de CRABP1 permitem estudos mecanísticos da dinâmica de transporte de retinoides, dos transcriptomas responsivos ao ácido retinoico e do crosstalk entre vias em modelos celulares humanos relevantes.

CRABP-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRABP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRABP-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRABP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRABP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRABP-I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRABP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRABP-I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRABP-I em células tumorais com expressão de CRABP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.