Plásmido Doble Nickase (h) CPTI-M: sc-401456-NIC

CPT1B codifica la carnitina palmitoiltransferasa 1B (CPTI-M), la enzima de la membrana mitocondrial externa asociada al músculo que cataliza el paso limitante de la velocidad: la formación de acilcarnitinas de cadena larga para su importación a la mitocondria y la posterior β-oxidación. Al controlar la entrada de ácidos grasos en la matriz mitocondrial, CPTI-M ayuda a regular el catabolismo lipídico, la homeostasis energética y el cambio de sustrato entre ácidos grasos y glucosa, integrándose con la señalización de AMPK, programas de transcripción metabólica impulsados por PPAR y el control del flujo de ácidos grasos mediado por malonil-CoA. La actividad o expresión alteradas de CPT1B se han relacionado con una oxidación de ácidos grasos desregulada, estrés lipotóxico y una remodelación metabólica relevante para fenotipos cardiometabólicos y la bioenergética muscular. En entornos de investigación, CPT1B se examina habitualmente en el contexto de la función mitocondrial, el perfilado de acilcarnitinas, la capacidad oxidativa y la adaptación metabólica a la disponibilidad de nutrientes.

CPTI-M El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPT1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPT1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPT1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPT1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.