CPTI-M Double Nickase Plasmid (h): sc-401456-NIC

CPT1B kodiert die Carnitin-Palmitoyltransferase 1B (CPTI-M), ein muskelassoziiertes Enzym der äußeren Mitochondrienmembran, das die geschwindigkeitsbestimmende Bildung langkettiger Acylcarnitine für den Import in die Mitochondrien und die anschließende β‑Oxidation katalysiert. Durch die Kontrolle des Fettsäureeintritts in die mitochondriale Matrix trägt CPTI-M zur Regulation des Lipidabbaus, der Energiehomöostase und des Substratwechsels zwischen Fettsäuren und Glukose bei und ist dabei in AMPK-Signalwege, PPAR-gesteuerte metabolische Transkriptionsprogramme sowie die malonyl‑CoA‑vermittelte Steuerung des Fettsäureflusses eingebunden. Eine veränderte CPT1B-Aktivität oder -Expression wurde mit dysregulierter Fettsäureoxidation, lipotoxischem Stress und metabolischem Remodeling in Verbindung gebracht, was für kardiometabolische Phänotypen und die Muskelenergetik relevant ist. In der Forschung wird CPT1B häufig im Kontext mitochondrialer Funktion, Acylcarnitin-Profiling, oxidativer Kapazität und metabolischer Anpassung an die Nährstoffverfügbarkeit untersucht.

CPTI-M Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CPT1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CPT1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CPT1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CPT1B-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.