CPTI-M Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419787

Descripción general

Cpt1b codifica la isoforma muscular de la carnitina palmitoiltransferasa 1 (CPTI-M), una enzima de la membrana mitocondrial externa que controla la entrada de ácidos grasos de cadena larga en las mitocondrias mediante la generación de acilcarnitinas. Como paso limitante de la β-oxidación mitocondrial, CPTI-M conecta el uso de lípidos con la homeostasis energética celular e interactúa funcionalmente con la regulación por malonil-CoA, la señalización de AMPK y programas metabólicos más amplios impulsados por PPAR. En tejidos de ratón con alta demanda oxidativa, la actividad de Cpt1b determina la selección de combustibles, la función mitocondrial y la partición de lípidos. Las alteraciones del flujo dependiente de CPTI-M se estudian con frecuencia en el contexto de la disfunción metabólica, la sensibilidad a la insulina y miopatías asociadas a lípidos, así como fenotipos cardiometabólicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPTI-M (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cpt1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cpt1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cpt1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPTI-M.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cpt1b para la investigación de la señalización de CPTI-M, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cpt1b críticos para la función de CPTI-M
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cpt1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CPTI-M CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CPTI-M CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cpt1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPTI-M (m) y el plásmido HDR CPTI-M (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cpt1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cpt1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.