Plasmide Double Nickase (h) CPTI: sc-401811-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPTI correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPTI Double Nickase (h) et le plasmide CPTI Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CPT1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPTI | sc-401811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CPTI | sc-401811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPT1A code la carnitine palmitoyltransférase 1A (CPTI), l’enzyme limitante de la vitesse qui transfère des groupes acyles à longue chaîne sur la carnitine afin de permettre leur import mitochondrial et la β‑oxydation. En contrôlant le flux des acides gras vers les mitochondries, CPTI coordonne le catabolisme lipidique avec l’équilibre énergétique cellulaire et s’inscrit à l’interface de la signalisation AMPK, des programmes transcriptionnels régulés par les PPAR et de la cétogenèse lors de stress nutritionnel. Une activité altérée de CPT1A a été associée à des erreurs innées de l’oxydation des acides gras et à des phénotypes métaboliques impliquant la gestion des lipides hépatiques et l’homéostasie du glucose. En cancérologie et en biologie des cellules immunitaires, l’oxydation des acides gras dépendante de CPT1A est fréquemment étudiée comme un déterminant du contrôle rédox, de la survie en situation de stress métabolique et d’états bioénergétiques spécifiques de certaines lignées cellulaires.
CPTI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPT1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPT1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPT1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPT1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.