Plásmido Doble Nickase (h) CPT1-C: sc-402510-NIC

La carnitina palmitoiltransferasa 1C (CPT1C) codifica la CPT1-C, una enzima homóloga asociada a las mitocondrias y enriquecida en el cerebro, que se ha implicado en la regulación del manejo de ácidos grasos de cadena larga y de procesos de detección de lípidos, más que en el flujo canónico de β-oxidación. La CPT1-C está vinculada a la homeostasis energética neuronal, la función mitocondrial y las respuestas adaptativas a la disponibilidad de nutrientes, que convergen con el metabolismo de ácidos grasos y las vías de estrés celular. Se han descrito alteraciones en la expresión de CPT1C en múltiples contextos tumorales y en modelos de enfermedad neurológica, lo que respalda investigar cómo la reprogramación del metabolismo lipídico y la regulación mitocondrial influyen en la supervivencia celular, la señalización y la diferenciación. En consecuencia, la CPT1-C se estudia con frecuencia por su contribución a la adaptación metabólica, el equilibrio redox y la bioenergética asociada al crecimiento en células humanas.

CPT1-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPT1C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPT1C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPT1C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPT1C alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.