Plasmide Double Nickase (h) CPSF6: sc-404919-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPSF6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPSF6 Double Nickase (h) et le plasmide CPSF6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CPSF6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPSF6 Antibody (F-3): sc-376228
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPSF6 | sc-404919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CPSF6 | sc-404919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPSF6 (facteur de spécificité de clivage et de polyadénylation 6) est un composant central du complexe CFIm, qui contribue à définir le traitement de l’extrémité 3′ des pré-ARNm en régulant le choix du site poly(A) et la polyadénylation alternative. En couplant le clivage/la polyadénylation à la transcription et à l’épissage, CPSF6 participe à la maturation des ARNm, à la stabilité des transcrits et aux programmes d’expression génique qui façonnent l’état cellulaire. CPSF6 intervient également dans des processus de liaison à l’ARN et d’export nucléaire, et a été impliquée dans des interactions hôte–pathogène, notamment l’entrée nucléaire du VIH-1 et le ciblage des sites d’intégration. Une dérégulation du traitement de l’extrémité 3′ et de la polyadénylation alternative liée à la fonction de CPSF6 est associée à une altération de la signalisation oncogénique et à un remodelage du transcriptome pertinent pour la maladie dans divers types cellulaires humains.
CPSF6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPSF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPSF6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPSF6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPSF6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.