CPSF6 Plasmide Double Nickase (h): sc-404919-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CPSF6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CPSF6 Double Nickase Plasmid (h) e il CPSF6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CPSF6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CPSF6 Antibody (F-3): sc-376228
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CPSF6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPSF6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPSF6 (fattore di specificità 6 della scissione e della poliadenilazione) è un componente centrale del complesso CFIm che contribuisce a definire l’elaborazione dell’estremità 3′ dei pre-mRNA regolando la scelta del sito di poli(A) e la poliadenilazione alternativa. Attraverso l’accoppiamento tra scissione/poliadenilazione e trascrizione e splicing, CPSF6 contribuisce alla maturazione dell’mRNA, alla stabilità dei trascritti e ai programmi di espressione genica che determinano lo stato cellulare. CPSF6 interagisce inoltre con processi di legame all’RNA ed esportazione nucleare ed è stato implicato nelle interazioni ospite–patogeno, incluso l’ingresso nucleare dell’HIV-1 e il targeting dei siti di integrazione. La deregolazione dell’elaborazione dell’estremità 3′ e della poliadenilazione alternativa collegata alla funzione di CPSF6 è associata ad alterazioni della segnalazione oncogenica e a un rimodellamento del trascrittoma rilevante per la malattia in diversi tipi cellulari umani.
CPSF6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPSF6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPSF6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPSF6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPSF6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.