Plásmido Doble Nickase (h) CPSF6: sc-404919-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CPSF6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CPSF6 (h) y el plásmido de doble nickasa CPSF6 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CPSF6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CPSF6 Anticuerpo (F-3): sc-376228
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CPSF6 | sc-404919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CPSF6 | sc-404919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPSF6 (factor de especificidad de escisión y poliadenilación 6) es un componente central del complejo CFIm que ayuda a definir el procesamiento del extremo 3′ de los pre-ARNm al regular la elección del sitio de poli(A) y la poliadenilación alternativa. Mediante el acoplamiento de la escisión/poliadenilación con la transcripción y el empalme, CPSF6 contribuye a la maduración del ARNm, la estabilidad de los transcritos y los programas de expresión génica que determinan el estado celular. CPSF6 también se relaciona con procesos de unión a ARN y de exportación nuclear, y se ha implicado en interacciones huésped–patógeno, incluida la entrada nuclear del VIH-1 y la orientación del sitio de integración. La desregulación del procesamiento del extremo 3′ y de la poliadenilación alternativa vinculada a la función de CPSF6 se asocia con una señalización oncogénica alterada y con una remodelación del transcriptoma relevante para enfermedades en diversos tipos celulares humanos.
CPSF6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPSF6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPSF6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPSF6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPSF6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.