CPSF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403190

Descripción general

CPSF4 (factor de especificidad de escisión y poliadenilación, subunidad 4) codifica un componente central de la maquinaria de procesamiento del extremo 3′ del ARNm que reconoce las señales de poliadenilación y coordina la escisión y la adición de la cola poli(A). A través de su función en el complejo de escisión y poliadenilación, CPSF4 ayuda a regular la maduración de los transcritos, la poliadenilación alternativa y la salida de la expresión génica, influyendo en la estabilidad del ARNm y en su traducción. La alteración de los factores de procesamiento del extremo 3′ puede cambiar el uso de los sitios de poli(A) y reprogramar de forma amplia las redes transcripcionales, lo que vincula la biología asociada a CPSF4 con el control del ciclo celular, las respuestas al estrés y los programas de diferenciación. La desregulación del procesamiento de ARN y la poliadenilación alternativa se observa con frecuencia en el cáncer y en otros contextos proliferativos o del neurodesarrollo, lo que convierte a CPSF4 en un nodo relevante para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPSF4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CPSF4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CPSF4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CPSF4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPSF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CPSF4 para la investigación de la señalización de CPSF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CPSF4 críticos para la función de CPSF4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CPSF4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CPSF4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CPSF4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CPSF4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPSF4 (h) y el plásmido HDR CPSF4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CPSF4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CPSF4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.