Plasmide CRISPR/Cas9 KO COX11 (h): sc-405874

Présentation

COX11 code une protéine de la membrane interne mitochondriale nécessaire à la biogenèse de la cytochrome c oxydase (complexe IV). Elle agit comme métallochaperon du cuivre, en aidant à acheminer le cuivre vers le cœur catalytique de COX1. Par ce rôle, COX11 soutient la phosphorylation oxydative, le transport d’électrons et la production cellulaire d’ATP, avec des effets en aval sur le potentiel de membrane mitochondriale et l’homéostasie rédox. Une perturbation de l’assemblage dépendant de COX11 peut diminuer la capacité respiratoire et favoriser des modifications secondaires de la signalisation des espèces réactives de l’oxygène et des réponses au stress métabolique. Les altérations de la fonction du complexe IV et de la protéostasie mitochondriale sont fréquemment étudiées dans le contexte de phénotypes neuromusculaires et neurodégénératifs, ainsi que du remodelage métabolique des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COX11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COX11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COX11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COX11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COX11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COX11 pour l'étude de la signalisation de COX11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COX11 essentiels à la fonction de COX11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COX11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COX11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COX11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COX11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COX11 plasmide HDR (h) et le COX11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COX11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COX11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.