Plásmido Doble Nickase (m) Cox-2: sc-422489-NIC

El gen **Ptgs2** de ratón codifica la **ciclooxigenasa-2 (Cox-2)**, una enzima inducible y limitante de la velocidad que convierte el ácido araquidónico en **prostaglandina H2**, proporcionando prostanoides aguas abajo como **PGE2**, que modulan el tono vascular, la sensibilización al dolor y el comportamiento de las células inmunitarias. La expresión de Cox-2 aumenta rápidamente en respuesta a señales inflamatorias, incluidas las vías de **NF-κB** y **MAPK** activadas aguas abajo de citocinas y receptores tipo Toll, lo que vincula la activación de la inmunidad innata con la biosíntesis de mediadores lipídicos. A través de su impacto en la señalización de prostaglandinas, Cox-2 influye en el reclutamiento de leucocitos, la producción de citocinas, la angiogénesis y la remodelación tisular. La actividad desregulada de Ptgs2 se estudia ampliamente en modelos de inflamación crónica, microambientes promotores de tumores y contextos de neuroinflamación y estrés metabólico.

Cox-2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ptgs2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ptgs2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ptgs2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ptgs2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.