Plásmido CRISPR de Activación (h) Cortactin: sc-400761-ACT

El gen humano **CTTN** codifica la **cortactina**, un sustrato de Src y andamiaje de unión a F-actina que promueve el ensamblaje de actina ramificada dependiente de Arp2/3 y estabiliza redes dinámicas de actina en la corteza celular. La cortactina coordina la señalización de los receptores tirosina quinasas y de las quinasas de la familia Src con la remodelación del citoesqueleto mediante interacciones con N-WASP, cofilina y adaptadores endocíticos, influyendo en la formación de lamelipodios, el recambio de adhesiones focales y el tráfico vesicular. A través de estos procesos, **CTTN** está estrechamente vinculado a la migración celular, el comportamiento tipo invasivo y la mecanotransducción, y su desregulación se ha asociado con programas de motilidad alterados y fenotipos de progresión tumoral. Por ello, **CTTN** se estudia con frecuencia en vías que regulan la dinámica de la actina, la endocitosis y las interacciones con la matriz extracelular.

Cortactin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTTN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cortactin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTTN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTTN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cortactin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTTN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cortactin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cortactin en células tumorales con expresión de CTTN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.