Plasmide CRISPR/Cas9 KO copine 1 (h): sc-406621

Présentation

CPNE1 code la copine 1, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du calcium, contenant des domaines C2 et un domaine A, qui favorise le recrutement à la membrane et les interactions protéine–protéine en réponse aux signaux Ca²⁺. La copine 1 a été impliquée dans la coordination du trafic membranaire, du remodelage du cytosquelette et de la transduction du signal, en couplant les flux de calcium à des interactions spatialement restreintes au niveau de la membrane plasmique et des compartiments endomembranaires. Parmi les liens fonctionnels rapportés figurent la modulation de la signalisation associée aux récepteurs et des réponses au stress cellulaire, avec des effets en aval sur les programmes de prolifération, de migration et de différenciation. Une expression ou une activité dérégulée de CPNE1 a été associée à la biologie tumorale et à d’autres troubles dans lesquels une signalisation calcique et une dynamique membranaire altérées contribuent à des phénotypes pathogènes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO copine 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CPNE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CPNE1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CPNE1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine copine 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CPNE1 pour l'étude de la signalisation de copine 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CPNE1 essentiels à la fonction de copine 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CPNE1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le copine 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le copine 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CPNE1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le copine 1 plasmide HDR (h) et le copine 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CPNE1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CPNE1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.