Plásmido Doble Nickase (h) COPB: sc-404275-NIC

COPB1 codifica la subunidad COPB del complejo coatomérico I (COPI), un componente central de las cubiertas vesiculares que median el transporte retrógrado desde el aparato de Golgi hacia el retículo endoplásmico y regulan el tráfico dentro del Golgi. A través de su papel en la selección de carga y la gemación de vesículas, COPB contribuye al mantenimiento de la arquitectura del Golgi, la homeostasis del RE y el flujo de la vía secretora, conectando con procesos de proteostasis y de respuesta al estrés como la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). La alteración de la función de COPI puede desorganizar la clasificación de proteínas y la dinámica de membranas, con efectos posteriores sobre la viabilidad y la señalización celular, lo que convierte a COPB1 en un punto de interés para estudiar la comunicación entre orgánulos y el tráfico de membranas en células humanas. Las vías de transporte intracelular desreguladas se implican con frecuencia en mecanismos de enfermedad proliferativa y del neurodesarrollo, lo que impulsa la investigación de fenotipos de tráfico dependientes de COPB1.

COPB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COPB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COPB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COPB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COPB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.