Contactin 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406301

Panoramica

CNTN2 codifica contactina 2 (TAG-1), una molecola di adesione cellulare della superfamiglia delle immunoglobuline ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI), particolarmente abbondante nel sistema nervoso. La contactina 2 favorisce la guida assonale, la crescita dei neuriti e la stabilizzazione delle interazioni neurone–glia organizzando complessi di riconoscimento sulla superficie cellulare e influenzando il rimodellamento del citoscheletro durante la formazione dei circuiti neurali. Contribuisce all’assemblaggio e al mantenimento di domini di membrana specializzati, come i segmenti iniziali dell’assone e i juxtaparanodi, attraverso interazioni con la matrice extracellulare e con partner di adesione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CNTN2 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendolo rilevante per studi sulla connettività sinaptica e sull’eccitabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNTN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNTN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNTN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Contactin 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNTN2 per lo studio della segnalazione di Contactin 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CNTN2 critici per la funzione di Contactin 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNTN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Contactin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Contactin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNTN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Contactin 2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Contactin 2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNTN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNTN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.