Plásmido Doble Nickase (h) connexin 46: sc-403947-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)connexin 46 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa connexin 46 (h) y el plásmido de doble nickasa connexin 46 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GJA3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: connexin 46 Anticuerpo (C-3): sc-365394
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) connexin 46 | sc-403947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) connexin 46 | sc-403947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA3 codifica la conexina 46, una proteína de uniones gap enriquecida en el cristalino que se ensambla en hemicanales y canales intercelulares para mediar la transferencia directa de iones y pequeños metabolitos de célula a célula. La conexina 46 favorece la diferenciación y la homeostasis de las células de las fibras del cristalino al contribuir al sistema de microcirculación del cristalino, coordinar el equilibrio redox y mantener el equilibrio iónico y osmótico. Mediante la regulación de la comunicación a través de uniones y de la permeabilidad de los hemicanales, influye en el manejo del calcio, la señalización por ATP y las respuestas celulares al estrés en un tejido ocular avascular. La alteración de la función de GJA3 se asocia con fenotipos de catarata hereditaria, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar los mecanismos de transparencia del cristalino y el control de calidad proteica en el entorno ocular.
connexin 46 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJA3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.