Plásmido CRISPR de Activación (h) connexin 43: sc-400241-ACT

GJA1 codifica la conexina 43 (Cx43), una de las principales proteínas de las uniones gap, que se ensambla en hemicanales y canales intercelulares para mediar el intercambio directo entre células de iones y pequeños metabolitos. Mediante la regulación del acoplamiento eléctrico, la señalización de calcio y la difusión de segundos mensajeros, Cx43 influye en la homeostasis tisular, la contracción coordinada, la reparación de heridas y el patrón de desarrollo. La función de la conexina 43 está integrada con redes de adhesión y del citoesqueleto, y se modula por un tráfico y recambio dependientes de la fosforilación. La expresión alterada de GJA1 o la regulación de apertura/cierre (gating) de los canales de conexina 43 se asocia con una comunicación intercelular alterada en trastornos de la conducción cardíaca, neuroinflamación e invasividad de células cancerosas, lo que la convierte en una diana frecuente en estudios de señalización celular y mecanismos de enfermedad.

connexin 43 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GJA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

connexin 43 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GJA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GJA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de connexin 43. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GJA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de connexin 43 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía connexin 43 en células tumorales con expresión de GJA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.