Plasmide Double Nickase (h) connexin 40: sc-401031-NIC

GJA5 code la connexine 40 (Cx40), une sous-unité de canal des jonctions communicantes (gap junctions) qui forme, via des connexons dans la membrane plasmique, des conduits intercellulaires assurant le couplage électrique et métabolique. Dans les tissus humains, Cx40 est particulièrement exprimée dans l’endothélium vasculaire et le système de conduction cardiaque, où elle favorise la propagation coordonnée des signaux et contribue à l’homéostasie tissulaire. La connexine 40 participe à l’assemblage et au renouvellement des jonctions communicantes, à la communication cellule–cellule, ainsi qu’à la régulation du tonus vasculaire et de la vitesse de conduction. Une expression dérégulée de GJA5 ou une altération de la fonction des canaux de connexines a été associée à des phénotypes cardiovasculaires, notamment des anomalies de conduction auriculaire et une susceptibilité aux arythmies, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en électrophysiologie et en signalisation endothéliale.

connexin 40 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.