connexin 37 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420559

Descripción general

El gen murino Gja4 codifica la conexina 37 (Cx37), una proteína de las uniones comunicantes (gap junctions) que se ensambla en canales intercelulares y permite el intercambio directo de iones y pequeños metabolitos para coordinar la homeostasis tisular. Cx37 contribuye a la señalización dependiente de contacto que moldea el comportamiento del endotelio y del músculo liso, con funciones en el desarrollo vascular, la regulación de la barrera y la mecanotransducción. Mediante la comunicación intercelular a través de uniones comunicantes, influye en procesos como el control del ciclo celular, la migración y la señalización inflamatoria. La alteración de la función de la conexina 37 se ha asociado con disfunción vascular y fenotipos relevantes para el sistema cardiovascular, lo que respalda su uso en modelos de angiogénesis, vías relacionadas con la trombosis y el diálogo cruzado entre el sistema inmunitario y el vascular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO connexin 37 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gja4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gja4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gja4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína connexin 37.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gja4 para la investigación de la señalización de connexin 37, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gja4 críticos para la función de connexin 37
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gja4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido connexin 37 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido connexin 37 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gja4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR connexin 37 (m) y el plásmido HDR connexin 37 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gja4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gja4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.