Plásmido Doble Nickase (h) connexin 26: sc-402132-NIC

GJB2 codifica la conexina 26, una subunidad de canales de uniones comunicantes (gap junctions) que se oligomeriza en conexones para mediar el intercambio intercelular directo de iones y pequeños metabolitos. Las uniones comunicantes que contienen conexina 26 coordinan la homeostasis tisular al sostener el acoplamiento eléctrico y metabólico, regular la fisiología de la barrera epitelial y modular la señalización de calcio y de segundos mensajeros. En el oído interno y los epitelios estratificados, la conexina 26 contribuye al reciclaje de iones potasio y a programas de diferenciación celular importantes para la función sensorial y cutánea. La alteración de GJB2 se asocia fuertemente con la hipoacusia hereditaria y con fenotipos ectodérmicos sindrómicos, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la biología de las uniones comunicantes y de redes de señalización específicas de tejido.

connexin 26 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.