connexin 26 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420565-ACT

O gene **Gjb2** de camundongo codifica a **conexina 26**, uma proteína tetraspânica de junção comunicante (gap junction) que se monta em **conexons** para formar canais intercelulares, permitindo a troca direta de íons e pequenos metabólitos. Por meio de uma comunicação intercelular coordenada via junções comunicantes, a conexina 26 ajuda a regular a homeostase epitelial, a reciclagem de potássio na cóclea e a sinalização sincronizada que afeta o fluxo de cálcio, o equilíbrio redox e respostas ao estresse. A função da conexina 26 se cruza com processos como formação de barreira, resposta a feridas e padronização do desenvolvimento, ao modular o acoplamento célula–célula e a coordenação elétrica e metabólica em nível tecidual. A atividade desregulada de **GJB2/conexina 26** é amplamente estudada no contexto de perda auditiva hereditária e distúrbios da barreira cutânea, e também é investigada por possíveis papéis na inflamação e na comunicação no microambiente tumoral.

connexin 26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gjb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

connexin 26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gjb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gjb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de connexin 26. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gjb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de connexin 26 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via connexin 26 em células tumorais com expressão de Gjb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.