COMT Double Nickase Plasmid (h): sc-401823-NIC

Catechol-O-Methyltransferase (COMT) ist eine zytosolische und membranassoziierte Methyltransferase, die Catechol-Substrate durch Übertragung einer Methylgruppe von S‑Adenosyl‑L‑methionin auf Catecholamine und catecholische Östrogene inaktiviert. Durch die Regulation des Umsatzes von Dopamin, Noradrenalin und Adrenalin beeinflusst COMT die Neurotransmitter-Homöostase sowie zelluläre Reaktionen auf oxidativen und metabolischen Stress. Die COMT-Aktivität ist in Monoamin-Stoffwechselwege eingebunden, wirkt neben der MAO-abhängigen Degradation und beeinflusst das Redoxgleichgewicht über den Oxidationszyklus von Catecholen. Genetische und expressionsbedingte Variationen von COMT wurden im Zusammenhang mit neuropsychiatrischen Phänotypen, Schmerzempfindlichkeit und hormonbezogener Biologie untersucht und unterstreichen die Relevanz von COMT als mechanistisches Ziel in der biomedizinischen Forschung.

COMT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COMT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COMT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COMT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COMT-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.