Plásmido CRISPR de Activación (h) COMMD1: sc-404544-ACT

COMMD1 (dominio del metabolismo del cobre que contiene 1) es una proteína adaptadora humana multifuncional que coordina la señalización dependiente de ubiquitina y el tráfico de proteínas. Es más conocida por modular la salida transcripcional de NF-κB mediante interacciones con el complejo IKK y con ligasas de ubiquitina tipo Cullin-RING, dando forma así a programas génicos de inflamación y respuesta al estrés. COMMD1 también contribuye a la clasificación endosomal y al recambio de proteínas de membrana, con efectos posteriores en vías como la señalización por hipoxia y la homeostasis de iones metálicos. La actividad desregulada de COMMD1 se ha asociado con alteraciones en la señalización inflamatoria, perturbaciones en el manejo del cobre y fenotipos relevantes para la biología del cáncer y la función hepatocelular en sistemas experimentales.

COMMD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COMMD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COMMD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COMMD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COMMD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COMMD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COMMD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COMMD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COMMD1 en células tumorales con expresión de COMMD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.