Plásmido CRISPR de Activación (h) COLEC11: sc-413098-ACT

COLEC11 codifica la colectina-11, una lectina tipo C secretada de reconocimiento de patrones que se une a motivos de carbohidratos en microbios y a estructuras propias alteradas para iniciar respuestas inmunitarias innatas. Mediante interacciones con proteasas MASP, COLEC11 participa en la activación del complemento por la vía de las lectinas, promoviendo la opsonización y la señalización inflamatoria posterior. Además de la defensa del huésped, COLEC11 contribuye a procesos del desarrollo como la migración celular y el patrón tisular, en consonancia con su expresión en múltiples contextos embrionarios. La actividad desregulada de la vía de las lectinas y las variaciones en COLEC11 se han asociado con la susceptibilidad a afecciones infecciosas e inflamatorias y con fenotipos congénitos del desarrollo, lo que la convierte en relevante para estudios mecanísticos de la biología mediada por el complemento.

COLEC11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COLEC11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COLEC11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COLEC11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COLEC11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COLEC11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COLEC11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COLEC11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COLEC11 en células tumorales con expresión de COLEC11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.