COLEC11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413098-ACT

COLEC11 kodiert Collectin-11, ein sezerniertes C‑Typ-Lektin zur Mustererkennung, das an Kohlenhydratmotive auf Mikroben sowie an veränderte körpereigene Strukturen bindet, um angeborene Immunantworten zu initiieren. Über Interaktionen mit MASP-Proteasen ist COLEC11 an der Komplementaktivierung des Lektinwegs beteiligt, fördert die Opsonierung und nachgeschaltete inflammatorische Signalwege. Über die Wirtsabwehr hinaus trägt COLEC11 zu Entwicklungsprozessen wie Zellmigration und Gewebemusterbildung bei, was mit seiner Expression in mehreren embryonalen Kontexten übereinstimmt. Eine dysregulierte Aktivität des Lektinwegs und Variationen in COLEC11 wurden mit einer erhöhten Anfälligkeit für infektiöse und entzündliche Erkrankungen sowie mit angeborenen Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht, wodurch es für mechanistische Studien zur komplementvermittelten Biologie relevant ist.

COLEC11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COLEC11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COLEC11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COLEC11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COLEC11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COLEC11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COLEC11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COLEC11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COLEC11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COLEC11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.