Plásmido CRISPR de Activación (h) COL7A1: sc-401235-ACT

COL7A1 codifica el colágeno de tipo VII, un componente clave de la matriz extracelular que forma fibrillas de anclaje que conectan la membrana basal de la epidermis con la dermis subyacente. Al estabilizar la unión dermoepidérmica, COL7A1 sustenta la integridad tisular, la mecanotransducción y los programas de reparación de heridas mediante la organización de la matriz y las vías de adhesión célula–matriz. La alteración de la expresión o la función de COL7A1 desorganiza la arquitectura de la membrana basal y se asocia fuertemente con fenotipos de fragilidad cutánea, incluida la epidermólisis bullosa distrófica, y contribuye a una reepitelización deficiente y a una remodelación fibrótica. Por ello, COL7A1 se estudia ampliamente en el diálogo queratinocito–fibroblasto, el ensamblaje de la matriz extracelular y la biología de la barrera epitelial.

COL7A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL7A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL7A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL7A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL7A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL7A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL7A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL7A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL7A1 en células tumorales con expresión de COL7A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.