Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL6A1: sc-401069-ACT

COL6A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type VI, un composant central du réseau microfibrillaire de collagène VI, qui contribue à organiser la matrice extracellulaire et à soutenir l’adhésion cellule–matrice ainsi que la stabilité mécanique des tissus. Les assemblages de collagène VI interagissent avec d’autres protéines matricielles et influencent l’architecture de la membrane basale, la signalisation couplée aux intégrines et des processus tels que l’activation des fibroblastes, la myogenèse et le remodelage associé aux plaies. Une expression altérée de COL6A1 ou des variants pathogènes sont associés à des myopathies liées au collagène VI et à des phénotypes du tissu conjonctif, et un dépôt matriciel dérégulé est fréquemment impliqué dans des programmes stromaux fibrosants et associés aux tumeurs. COL6A1 est donc largement étudié dans les voies qui régissent l’organisation de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et la survie cellulaire en situation de stress.

COL6A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL6A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL6A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL6A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL6A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL6A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL6A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL6A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL6A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL6A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.