COL4A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419744

Descripción general

Col4a2 codifica la cadena α2 del colágeno tipo IV (COL4A2), un componente estructural central de las membranas basales que forma una red heterotrimérica con otras cadenas de colágeno IV para sostener la arquitectura tisular. Este andamiaje de la matriz extracelular regula la adhesión, la migración y la polaridad celulares, y modula la comunicación de señalización con integrinas y vías de factores de crecimiento implicadas en la estabilidad vascular y el desarrollo de órganos. La alteración de la función de COL4A2 se asocia con la fragilidad de la membrana basal y la patología de pequeños vasos, lo que la hace relevante para estudios sobre la integridad cerebrovascular, el desarrollo ocular y las barreras de filtración renal. En modelos murinos, Col4a2 ofrece un punto de entrada manejable para diseccionar mecanismos impulsados por la matriz que influyen en el comportamiento endotelial y epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL4A2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Col4a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Col4a2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Col4a2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL4A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Col4a2 para la investigación de la señalización de COL4A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Col4a2 críticos para la función de COL4A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Col4a2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL4A2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido COL4A2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Col4a2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL4A2 (m) y el plásmido HDR COL4A2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Col4a2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Col4a2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.