Plásmido CRISPR de Activación (h) COL2A1: sc-400359-ACT

COL2A1 codifica la cadena α1 del colágeno de tipo II, un componente fibrilar principal de la matriz extracelular del cartílago que sostiene la resistencia a la tracción y la hidratación del tejido mediante interacciones con proteoglicanos. Su expresión está estrechamente vinculada a la diferenciación de los condrocitos y a los programas de ensamblaje de la matriz, coordinados por redes transcripcionales impulsadas por SOX9 y por vías de remodelación de la matriz extracelular. La alteración de COL2A1 modifica la integridad estructural del cartílago y puede perturbar procesos de desarrollo endocondral relevantes para la biología esquelética y articular. La variación genética o la expresión desregulada de COL2A1 se han asociado con displasias hereditarias del cartílago y del esqueleto, por lo que constituye un objetivo frecuente para estudiar la homeostasis de la matriz extracelular y la regulación del linaje condrocitario.

COL2A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL2A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL2A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL2A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL2A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL2A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL2A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL2A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL2A1 en células tumorales con expresión de COL2A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.