COL23A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413896

Panoramica

COL23A1 codifica il collagene di tipo XXIII alfa 1, un collagene transmembrana arricchito sulla superficie cellulare, dove contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare e all’adesione cellula–matrice. Influenzando le interazioni con componenti della membrana basale e con complessi associati alle integrine, COL23A1 può modulare processi legati all’architettura epiteliale, alla migrazione e al rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di COL23A1 sono state riportate in diversi contesti correlati a cancro e fibrosi, a supporto della sua utilità come marcatore e nodo meccanicistico in studi su invasione, potenziale metastatico e rimodellamento stromale. In quanto collagene associato alla membrana, rappresenta un punto di accesso sperimentale pratico per indagare come i segnali della MEC pericellulare plasmino la segnalazione e il comportamento cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL23A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL23A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL23A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL23A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL23A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL23A1 per lo studio della segnalazione di COL23A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL23A1 critici per la funzione di COL23A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL23A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL23A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL23A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL23A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL23A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL23A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL23A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL23A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.