Plásmido Doble Nickase (h) COL1A1: sc-400064-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COL1A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COL1A1 (h) y el plásmido de doble nickasa COL1A1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COL1A1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COL1A1 Anticuerpo (H-7): sc-518272
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COL1A1 | sc-400064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COL1A1 | sc-400064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL1A1 codifica la cadena pro-α1 del colágeno tipo I, un componente estructural principal de la matriz extracelular que se ensambla en colágeno fibrilar y aporta resistencia a la tracción a los tejidos conectivos. Su biosíntesis y maduración implican el procesamiento en el retículo endoplásmico (RE), la hidroxilación de prolina/lisina, la formación de la triple hélice, la secreción y la fibrilogénesis extracelular, vinculando a COL1A1 con vías de organización de la MEC, adhesión célula–matriz y remodelación tisular. La expresión de COL1A1 está estrechamente acoplada a programas de activación de fibroblastos y a señales como TGF-β que coordinan el depósito de matriz y la reparación de heridas. Alteraciones genéticas o regulatorias de COL1A1 se asocian con fenotipos del tejido conectivo y del esqueleto, y se estudian ampliamente en el contexto de la fibrosis y la remodelación del microambiente tumoral.
COL1A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL1A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL1A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL1A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL1A1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.