COL17A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419738

Descripción general

Col17a1 codifica el colágeno tipo XVII alfa 1 (COL17A1), un colágeno transmembrana y componente central de los hemidesmosomas que ancla los queratinocitos basales a la membrana basal subyacente. COL17A1 interactúa con la laminina-332 y con complejos de integrinas para sostener la adhesión epidérmica, la organización de la membrana basal y la homeostasis de los anexos cutáneos, y su desprendimiento regulado del ectodominio influye en la migración de queratinocitos y en la remodelación asociada a heridas. En tejidos de ratón, COL17A1 contribuye a la integridad epitelial y a la mecanotransducción en la unión dermoepidérmica, conectando señales de la matriz extracelular con la estabilidad del citoesqueleto. La alteración de la función de COL17A1 es de amplia relevancia para estudios sobre fragilidad cutánea, fenotipos ampollosos, el ciclo del folículo piloso y defectos de la barrera epitelial asociados a la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL17A1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Col17a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Col17a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Col17a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL17A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Col17a1 para la investigación de la señalización de COL17A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Col17a1 críticos para la función de COL17A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Col17a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL17A1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido COL17A1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Col17a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL17A1 (m) y el plásmido HDR COL17A1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Col17a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Col17a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.