Plásmido CRISPR de Activación (h) COL17A1: sc-402747-ACT

El COL17A1 humano codifica el colágeno tipo XVII alfa 1, un colágeno hemidesmosómico transmembrana (BP180) que ancla los queratinocitos basales a la membrana basal al conectar componentes de la matriz extracelular con filamentos intermedios de queratina intracelulares. Favorece la adhesión epidérmica, la integridad de la unión dermoepidérmica y la homeostasis del tejido epitelial, e influye en procesos como la señalización célula–matriz, la estabilidad mecánica y la remodelación asociada a la cicatrización. La función de COL17A1 está estrechamente vinculada a las vías de ensamblaje de los hemidesmosomas y de organización de la membrana basal, con efectos posteriores sobre el mantenimiento de la barrera epitelial. La expresión desregulada de COL17A1 o la alteración de su integridad estructural se asocia con fenotipos cutáneos ampollosos y con patología dermatológica relacionada con autoantígenos, por lo que es relevante para estudios de adhesión epitelial y biología de la piel.

COL17A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL17A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL17A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL17A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL17A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL17A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL17A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL17A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL17A1 en células tumorales con expresión de COL17A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.