Plásmido Doble Nickase (h) COL12A1: sc-402361-NIC

El COL12A1 humano codifica la cadena alfa 1 del colágeno tipo XII, un colágeno asociado a fibrillas que se localiza en la matriz extracelular e interactúa con fibrillas que contienen colágeno I para regular la arquitectura de la matriz, sus propiedades tensiles y la comunicación célula–matriz. A través de sus funciones en la fibrilogénesis del colágeno, la organización tisular y la mecanotransducción, COL12A1 contribuye al acoplamiento con el citoesqueleto y a vías de señalización que configuran programas de adhesión y migración. La alteración de la expresión o la función de COL12A1 se ha asociado con trastornos hereditarios del tejido conectivo y con fenotipos que afectan la integridad muscular y esquelética, lo que lo hace relevante para estudios de remodelación de la matriz y biología del desarrollo. En investigación de cáncer y fibrosis, COL12A1 se examina con frecuencia como parte de firmas estromales de matriz extracelular asociadas con cambios en la rigidez tisular y el comportamiento invasivo.

COL12A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL12A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL12A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL12A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL12A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.