Plásmido CRISPR de Activación (h) COL10A1: sc-401960-ACT

COL10A1 codifica el colágeno tipo X alfa 1, un colágeno de cadena corta expresado principalmente por los condrocitos hipertróficos durante la osificación endocondral. Contribuye a la organización de la matriz extracelular y a la transición de cartílago a hueso al dar forma a la matriz pericelular y favorecer la remodelación asociada a la mineralización. La expresión de COL10A1 está estrechamente acoplada a los programas de diferenciación de los condrocitos, regulados por vías como la señalización TGF-β/BMP, el control transcripcional mediado por RUNX2 y los procesos de recambio de la matriz. La desregulación de COL10A1 se asocia con trastornos del desarrollo esquelético, incluida la displasia condro-metafisaria de Schmid, y también se observa en contextos de remodelación patológica de la matriz relevantes para la investigación en hueso y cartílago.

COL10A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL10A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL10A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL10A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL10A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL10A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL10A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL10A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL10A1 en células tumorales con expresión de COL10A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.