COG5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411474

Descripción general

COG5 codifica una subunidad central del complejo de anclaje COG (conserved oligomeric Golgi, oligomérico conservado del Golgi), que coordina el tráfico vesicular retrógrado dentro del aparato de Golgi. Al facilitar el acoplamiento de vesículas y la fusión dependiente de SNARE, COG5 ayuda a mantener la arquitectura del Golgi, la localización de enzimas y el procesamiento eficiente de la carga secretora. La alteración de la función del complejo COG perturba la homeostasis de la glicosilación y puede modificar la composición de la superficie celular y de la matriz extracelular, afectando vías vinculadas a la clasificación de proteínas, la secreción y la organización de membranas. Se han asociado variantes en COG5 y en otros componentes relacionados del COG con trastornos congénitos de la glicosilación y con fenotipos más amplios relacionados con un tráfico defectuoso del Golgi.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COG5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COG5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COG5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COG5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COG5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COG5 para la investigación de la señalización de COG5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COG5 críticos para la función de COG5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COG5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COG5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COG5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COG5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COG5 (h) y el plásmido HDR COG5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COG5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COG5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.