Cochlin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405944

Descripción general

COCH codifica la coclina, una proteína secretada de la matriz extracelular altamente enriquecida en el oído interno, donde contribuye a la organización estructural y a la homeostasis mecánica de los tejidos auditivos y vestibulares. La coclina contiene dominios LCCL y dominios tipo A del factor de von Willebrand que favorecen las interacciones con la matriz y pueden influir en la señalización célula–matriz, la remodelación tisular y las respuestas inflamatorias. La alteración de la función de COCH se asocia con trastornos hereditarios de la audición y del equilibrio, y el depósito de coclina se ha relacionado con cambios degenerativos en la cóclea y el aparato vestibular. Como proteína asociada a la matriz, la coclina se estudia en vías que regulan el ensamblaje de la matriz extracelular, la mecanotransducción y las respuestas al estrés en epitelios sensoriales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cochlin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COCH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COCH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COCH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cochlin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COCH para la investigación de la señalización de Cochlin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COCH críticos para la función de Cochlin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COCH para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cochlin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cochlin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COCH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cochlin (h) y el plásmido HDR Cochlin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COCH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COCH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.