Plásmido Doble Nickase (h) CNTFRα: sc-402322-NIC

El receptor alfa del factor neurotrófico ciliar (CNTFRα), codificado por el gen CNTFR, es una subunidad receptora anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que confiere especificidad de unión al ligando dentro del complejo receptor de CNTF. Tras la unión de CNTF, CNTFRα coopera con LIFR y gp130 para iniciar la señalización JAK/STAT, con acoplamiento adicional a las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT, que regulan la supervivencia y diferenciación neuronal, así como la biología de la glía. La actividad de la vía CNTFR se estudia ampliamente en el contexto del neurodesarrollo y la neurodegeneración, donde la expresión alterada del receptor o el tono de señalización pueden influir en el mantenimiento neuronal y la respuesta al daño. La desregulación de la señalización del eje CNTF/CNTFR se ha relacionado con fenotipos celulares relevantes para la enfermedad en modelos de trastornos de neuronas motoras y de la retina, lo que respalda la investigación mecanística en sistemas celulares humanos.

CNTFRα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNTFR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNTFR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNTFR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNTFR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.