Plasmide CRISPR d'Activation (h) CNP-53: sc-403527-ACT

NPPC code le peptide natriurétique de type C (CNP-53), une hormone peptidique sécrétée qui transmet principalement son signal via le récepteur 2 des peptides natriurétiques (NPR2/GC-B) afin d’augmenter le cGMP intracellulaire et d’activer des voies dépendantes de la PKG. Dans les tissus humains, CNP-53 régule l’ossification endochondrale, la prolifération et la différenciation des chondrocytes, ainsi que l’homéostasie vasculaire, en s’intégrant à la signalisation cGMP pour moduler le remodelage de la matrice extracellulaire et les programmes de croissance cellulaire. La signalisation NPPC–NPR2 recoupe des processus régulés par les MAPK et le calcium, qui façonnent le développement du cartilage et la croissance du squelette. La perturbation génétique de NPPC ou de l’axe de son récepteur est associée à des anomalies de la croissance longitudinale des os et à des dysplasies squelettiques, ce qui rend cette voie pertinente pour modéliser la biologie du cartilage de croissance et les phénotypes du tissu conjonctif.

CNP-53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPPC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CNP-53 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPPC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPPC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CNP-53. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPPC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CNP-53 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CNP-53 dans les cellules tumorales présentant une expression de NPPC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.