Plásmido Doble Nickase (m) CLPTM1: sc-425178-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CLPTM1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CLPTM1 (m) y el plásmido de doble nickasa CLPTM1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Clptm1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CLPTM1 Anticuerpo (G-7): sc-374619
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CLPTM1 | sc-425178-NIC | 20 µg | $410.00 |
Clptm1 codifica CLPTM1, una proteína transmembrana de múltiples pasos localizada predominantemente en membranas intracelulares, incluido el retículo endoplásmico, donde se cree que contribuye al tráfico de proteínas de membrana y a las respuestas celulares al estrés. En ratón y otros sistemas de mamíferos, CLPTM1 se ha vinculado con la regulación de la expresión en la superficie de receptores y canales iónicos, lo que la implica en procesos como la señalización sináptica y la adaptación celular a desafíos de proteostasis. La alteración de la expresión de CLPTM1 se ha asociado con fenotipos relacionados con el cáncer y con vías de respuesta a fármacos en varios contextos modelo, lo que respalda investigar sus funciones en la señalización de supervivencia y la sensibilidad celular a factores estresantes. Los estudios funcionales suelen centrarse en cómo CLPTM1 influye en la organización de membranas, el transporte y las redes de señalización aguas abajo relevantes para la biología neurológica y oncogénica.
CLPTM1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Clptm1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Clptm1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Clptm1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Clptm1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.